中国微循环 1999年第2期第3卷 临床研究
作者：孙慧谨 江 芹 吴德霞
单位：210004 南京市妇幼保健院科研室
关键词：盆腔炎；血液流变学
【摘要】 目的 探讨脑梗塞患者红细胞膜脂质成分改变及其与血粘度的关系。方法 对58例脑梗塞患者和26名健康人的红细胞膜脂质成分、全血粘度进行了测定。结果 患者红细胞膜胆固醇（CHO）含量升高，磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）含量降低，全血粘度升高。直线相关分析，PC与全血高切粘度呈负相关，神经鞘磷脂（SM）与全血低切粘度呈正相关。结论 脑梗塞患者红细胞膜不仅存在胆固醇代谢异常，同时也存在磷脂组分代谢障碍，后者对血粘度产生影响。
在脑梗塞的发病机理方面，血流变学异常占有重要位置。红细胞是血液的主要有形成分，研究红细胞膜生化组成与血液流变学的关系成为人们关注的课题。目前大量研究发现，脑梗塞患者存在红细胞膜胆固醇的代谢障碍，并导致血流变异常［1］，但尚未见红细胞膜磷脂各组分改变及其与血流变关系的报道。本文采用高效液相色谱法（HPLC）检测脑梗塞患者红细胞膜磷脂各组分的变化，并探讨其对血粘度的影响。
对象与方法
1 实验对象 58例脑梗塞患者，男35例，女23例。年龄44～72岁，平均56.46±7.18岁。均经CT确诊为脑梗塞。对照组26例，男17例，女9例。年龄45～64岁，平均54.40±4.63岁。均排除其它神经系统疾病、高血压、冠心病、糖尿病及血液系统疾病。
2 红细胞膜制备 肘静脉采血4ml，肝素抗凝，参考Dodge法［2］制备红细胞膜悬液。
3 红细胞膜脂质抽提 取上述红细胞膜悬液，按Folch法［3］进行膜脂质抽提。
4 红细胞膜胆固醇的测定 取上述抽提的含脂氯仿液，氮气吹干，参照Parekh法［4］进行膜胆固醇含量测定。
5 膜磷脂各组分测定
5.1 试剂来源 磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）、神经鞘磷脂（SM）均系Sigma公司产品。乙腈（色谱纯）系北京昌化精细化工厂产品，甲醇（优质醇）系北京化工厂产品。磷酸（优质纯）系上海联合化工厂产品。
5.2 仪器 高效液相色谱仪为Waters公司产品，包括510型液相色谱泵、600E控制器、484检测器、745B数字处理机。选用Spherisorb硅胶色谱柱（250mm×4.6mm），由大连生化物理研究所提供。
5.3 色谱条件 参考Shafiq-UR-Rehman建立的方法［5］并改进。取上述抽提的脂质氯仿液，氮气吹干，封口膜封口后置-20℃冰箱贮存。高效液相测定时用正己烷：异丙醇（3∶1V/V）溶解。流动相为乙腈：甲醇：85％磷酸（100∶10∶1.8V/V/V)。流速1.5ml/min，检测波长203nm，柱温20℃下进行色谱分析。
6 膜悬液蛋白定量 取红细胞膜悬液，按Lowry法［6］进行膜悬液蛋白定量。
7 多切变粘度测定 选未经治疗的急诊入院患者，立即采血。采用NEX-1型锥板粘度计，取307.2S-1、153.6S-1、30.72S-1、15.36S-1四个剪切率，做全血粘度测定。
两均数间比较采用未配对计量资料比较的t检验，各变量间相关程度采用直线相关分析。
结 果
1 抽提的红细胞膜磷脂高效液相色谱图（图1）
图1 红细胞膜磷脂高效液相色谱图
PS磷脂酰丝氨酸 PE磷脂酰乙醇胺
PC磷脂酰胆碱 SM神经鞘磷脂
2 脑梗塞组与对照组红细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）、神经鞘磷脂（SM）、胆固醇（CHO）的含量比较见表1。单位均为umol/mg膜蛋白。
表1 脑梗塞患者与健康人红细胞膜脂质成分含量（
±s）
| 组别 | 例数 | PS | PE | PC | SM | CHO |
| 患者组
对照组 |
58
26 |
0.096±0.013
0.104±0.016 |
0.198±0.015**
0.235±0.022 |
0.212±0.022**
0.235±0.021 |
0.198±0.024
0.190±0.017 |
0.807±0.093*
0.742±0.075 |
注： *P＜0.05 **P＜0.01
3 脑梗塞患者与对照组多切变粘度比较见表2。单位为mPa·s。
4 脑梗塞患者红细胞膜脂质成分与血粘度相关分析见表3。
表2 患者组与对照组多切变粘度比较（±s）
| 组别 | 例数 | 307.2S-1 | 153.6S-1 | 30.72S-1 | 15.36S-1 |
| 患者组
对照组 |
58
26 |
6.019±0.753*
5.543±0.724 |
6.524±0.858*
5.967±0.782 |
8.468±1.402*
7.441±1.286 |
9.713±1.962*
8.637±1.563 |
注： *P＜0.01
表3 58例患者红细胞膜脂质成分与多切变粘度相关分析（r）值
| 项目 | 307.2S-1 | 153.6S-1 | 30.72S-1 | 15.36S-1 |
| PS
PE PC SM CHO |
0.0166
-0.0455 -0.3824** 0.2128 0.2461 |
-0.1169
-0.044 -0.3071* 0.2802* 0.2037 |
-0.2048
-0.0507 -0.2531 0.3652**? 0.1782 |
-0.2611
-0.1243 -0.2048 0.4016** 0.2243 |
注： *P＜0.05 ?**P＜0.01讨 论
大量研究确认脑梗塞患者存在红细胞膜胆固醇的代谢异常，但对红细胞膜磷脂的改变，迄今仅用化学定量法测定了膜总磷脂的变化，结果不一［1，7］。红细胞膜磷脂主要包括PS、PE、PC、SM四种组分。本研究采用高效液相色谱法对红细胞膜磷脂四种组分进行了分离测定，发现患者红细胞膜PC、PE含量显著降低（P＜0.01）。提示脑梗塞患者红细胞膜不仅存在胆固醇升高等公认的代谢异常，同时也存在以PE、PC降低为主的磷脂组分代谢障碍。
磷脂是构成红细胞膜流体镶嵌脂质双层的主要成分及胞膜酶体系的调节剂，它们与红细胞膜的物质转运、胞膜流动性及红细胞形态密切相关，并影响血液的粘滞性和血液凝固［8］。本研究取307.2S-1、153.6S-1、30.72S-1、15.36S-1四个切变速率，按掼例将大于80S-1视为高切，小于50S-1视为低切，发现脑梗塞患者全血高低切粘度均显著升高。全血粘度是反映血液中各种有形成分和血浆成分异常的复合指标，是血液流变学的主要参数，主要影响因素有红细胞变形性、红细胞聚集性、红细胞数量和体积等。一般认为高切粘度的高低主要反映了红细胞变形性的变化，低切粘度的高低主要反映了红细胞聚集性的强弱。本研究显示，患者红细胞膜PC与全血高切粘度呈显著负相关，膜SM主要与全血低切粘度显著正相关。此表明患者红细胞膜磷脂组分的改变对全血高低切粘度产生了影响，也间接反映了膜PC、SM与红细胞变形性、聚集性的关系，这与红细胞膜PC的弹性特征、膜SM的刚性特征相符合。
胆固醇是红细胞膜脂质双层的另一主要成分，主要与膜磷脂结合，降低磷脂邻近侧链间的相互作用，使脂质双层排列的有序性增强，流动性降低，进而影响红细胞的变形性，致血流变异常［1］。本文红细胞膜胆固醇与全血高低切粘度相关均不密切，提示在影响血粘度方面，红细胞膜磷脂比膜胆固醇具有更重要的作用。
参考文献
1 冷贵生，郭述苏，刘丽，等．缺血性中风红细胞变形能力与膜微粘度及膜生化改变的相关性研究．中国病理生理杂志．1993，9：595
2 Dodge JT，Mitchell C，hanahan DJ．The preparation and chemical characteristics of hemoglobin-free ghosts of human erythrocytes．Arch Biochem Biophs．1963，100：119
3 Folch J，Less M，Stanley CH．A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues．J Biol Chem．1957；226：497
4 Parekh AC，Jung DH，Cholersterol determination with ferric acetateuranium acetate and sulfuric acid-ferrous sulfate reagents．Anal Chem．1970，42：1423
5 Shafiq-UR-Rehman．Rapid isocratic method for the separation and quantification of major phospholipid classes by high performance liquid chromatography．J．Chromatogr．1991，567：29
6 Lowry OH，Rosebrough NJ，Farr AL，et al．Protein measurement with the Folin phenol reagent．J Biol Chem．1951，193：265
7 潘旭东，韩仲岩，陆九高，等．红细胞膜胆固醇、磷脂及二者比值在脑血管疾病中的测定研究．中风与神经疾病杂志．1995，12：154
8 唐建华，卢义钦．红细胞膜的磷脂代谢．生理科学进展．1990，21：31
收稿： 1998-04-13 修回： 1998-05-20